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Blood & Cell Culture DNA Mini Kit(Genomic-tip)

血液、细胞DNA小量提取试剂盒(阴离子交换柱法)

¥2298.00

CW3712S

25 preps

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本试剂盒采用新型阴离子交换树脂技术方法,可应用于样本类型为血液、细胞的高分子量基因组DNA的提取,提取长度可达150 kb。该方法通过重力流操作将动手时间减少到最小限度,多个样本可同时操作,同时整个纯化过程不需要苯酚或氯仿等有毒试剂,操作更加安全方便,3 h内即可获得高产量、高纯度的基因组DNA。纯化得到的DNA可用于测序、胚胎干细胞克隆的筛选、PCR等分子生物学实验。
保存条件 运输条件
Buffer C1 2-8℃,others RT (15-30℃) 室温
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Q1:加入缓冲液C1后,血样未变为半透明状态的原因及解决办法?
A1:

Buffer C1和蒸馏水的比例不正确。确保在步骤1中将Buffer C1和蒸馏水以正确的比例(13)添加到样品中。

Q2:DNA产量低的解决办法?
A2:

1. 细胞或血液样本量过少会导致起始DNA总量不足,应严格按照说明书要求加入相应体积的样本量。 

2. 缓冲液保存不当可能影响实验效果, Buffer C1须密封保存于2-8℃冰箱,使用前检查是否有蒸发或污染情况,确保试剂质量。

3. 裂解步骤中Buffer C1和蒸馏水的比例严格控制在1:3,充分混匀后冰上孵育10分钟,确保样本完全裂解。

4. 使用冷冻样本前必须完全解冻,避免反复冻融。

5. Genomic-tip 20/G柱子使用前须用1mL Buffer CBT平衡,让液体依靠重力自然流下,切勿施加外力加压,平衡不充分会显著降低DNA结合效率。

6. 基因组DNA沉淀步骤需特别小心,离心后吸弃上清时枪头不要触碰管底沉淀,此步骤操作不当会导致DNA大量丢失。

7. 洗脱Buffer QF可提前在50℃水浴中预热,预热后的Buffer QF能提高DNA洗脱效率。

Q3:Genomic-tip 20/G堵塞如何解决?
A3:

上样前须将裂解液充分离心,并用移液枪小心吸取上清液,避免吸入沉淀物或细胞碎片;按说明书控制样本量,过量样本会导致树脂超载而堵塞。

Q4:能否用水洗脱DNA?
A4:

若下游实验对pH值敏感,可采用灭菌水作为洗脱液。使用前需调节水的pH值至7.0-8.5(可用NaOH调节),pH值低于7.0会显著降低洗脱效率。如需长期保存洗脱产物,推荐使用Buffer TB洗脱,并于-20℃保存。

Q5:DNA在下游应用中表现不佳该如何解决?
A5:

DNA在下游应用中表现不佳通常由以下原因导致:

1. 洗脱液中DNA含量极低。解决办法:请参考前文A2部分的解决方案。

2. 乙醇残留。解决办法:70%乙醇洗涤后,彻底吸弃上清,室温风干 5–10分钟

3. 存在盐离子残留。解决办法:确保异丙醇在室温(15 - 25°C)下沉淀,并用冷的70%乙醇洗涤沉淀两次;可重新沉淀DNA以除去盐。

4. DNA用量过多影响下游实验。解决办法:过量DNA可能抑制酶反应,建议使用分光光度计在260nm处测定DNA浓度,精确控制使用量。

Q6:如何避免DNA断裂?
A6:

操作过程中需轻柔混匀(避免剧烈震荡或涡旋),减少剪切力。

Q7: 如何检测DNA长度?
A7:

使用脉冲场电泳(PFGE),条件:1%琼脂糖,0.5X TBE6 V/cm,脉冲时间1-25 s,电泳16小时。

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